描写的是一对孪生姊妹(胡蝶兼饰)的不同遭遇。妹妹二宝自幼跟随私贩洋枪的父亲逃往城市,长大以后被父亲送给了军阀钱督办做姨太太;姐姐大宝则和母亲(宣景琳饰)一起住在乡下,后来嫁给一个穷苦的木匠桃哥(郑小秋饰),父母姊妹不通音讯,彼此不知下落。十多年后,大宝夫妇和母亲从乡下流落到城市。桃哥去做工,大宝抛下未满月的孩子,到钱督办的公馆去当奶妈,她带的正好是二宝的孩子。二宝作为主妇,对大宝非常冷淡,甚至因为大宝外貌酷似自己而感到反感;大宝为了保住饭碗,只好尽心服侍小主人。一天,桃哥干活时摔伤,无钱医治,大宝便恳求二宝预支一点工钱,但二宝非但不肯,反而打了大宝一记耳光。大宝为了救治丈夫,便窃取了小主人的金锁片,不巧又被钱督办的妹妹撞见,大宝失手碰倒花瓶,致使钱妹遭误伤而亡,大宝即以杀人罪入狱。大宝入狱后,母亲前来探监,才发现主办大宝一案的军法处长正是遗弃自己多年的丈夫。丈夫在妻子的愤怒斥责和要求下,安排妻子和大宝、二宝会面。真相大白后,二宝终于为母亲和姐姐的苦难遭遇所感动,不顾父亲劝阻,带领她们驱车前往钱督办处求情。
1934年,《姊妹花》被评选为最佳有声片;1935年,《姊妹花》曾和《渔光曲》等影片一起被推荐参加莫斯科电影节展映。
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